western blot 하는 방법

웨스턴 블롯 (Western blot)은 단백질을 검출하고 양적으로 측정하기 위한 분자 생물학 실험 기술 중 하나입니다.

이 기술은 단백질의 분자량과 크기를 파악하거나 특정 단백질을 탐지하기 위해 사용됩니다.

다음은 웨스턴 블롯을 수행하는 기본 단계를 상세히 설명합니다.

재료 및 장비:

1. 셀 추출용 용액 (RIPA 버퍼 또는 유사한 용액)
2. 단백질 추출용 시료 (세포 또는 조직)
3. SDS-PAGE 겔 (단백질의 크기에 따라 다른 겔 사용)
4. 전기영동탱크
5. 전기영동 버퍼
6. 낮은 분자량 단백질 마커
7. 전기영동 시스템 (전기영동 장비)
8. 단백질을 겔에서 전달하기 위한 전송 장비
9. 단백질을 면이나 멤브레인에 이식하기 위한 전송 버퍼
10. 단백질을 면에 이식하는 전송 시스템
11. 면 또는 멤브레인 (PVDF 또는 니트로셀룰로오스 등)
12. 단백질을 탐지하기 위한 항체
13. 바인딩 버퍼 (항체와 겔 간의 상호 작용을 개선)
14. 형광 또는 효소로 부착된 이차 항체 (옵션)
15. 화상 캡처 시스템 (단백질 밴드를 감지하기 위해)
16. 염색 용액 (코마시 블루 또는 Ponceau S 등)
17. 이미지 분석 소프트웨어

실험 절차:

1. 샘플 추출 및 단백질 분리: 단백질을 추출하려는 조직 또는 세포를 적절한 버퍼 (RIPA 버퍼 등)로 처리하여 단백질을 추출합니다. 추출한 단백질을 SDS-PAGE 겔을 사용하여 크기 별로 분리합니다. SDS-PAGE 겔을 주로 10% 또는 12%로 사용합니다.
2. 전기영동 (Electrophoresis): 겔에 담긴 단백질을 전기영동 장비를 사용하여 분리합니다. 전기를 통해 단백질은 겔을 통해 이동하며 크기에 따라 분리됩니다. 분리된 단백질은 겔 위에서 총전량 검출용 염색 용액 (코마시 블루 또는 Ponceau S)으로 염색하여 밴드를 시각적으로 확인합니다.
3. 전송 (Transfer): 겔에서 단백질을 면 또는 멤브레인 (PVDF 또는 니트로셀룰로오스)으로 전송합니다. 이는 단백질을 검출하기 위해 면 또는 멤브레인 위에서 항체와 상호 작용할 수 있도록 하는 단계입니다.
4. 항체 바인딩 (Antibody Incubation): 면 또는 멤브레인에 단백질이 전송되면, 단백질을 탐지하기 위한 특정 항체를 사용하여 바인딩시킵니다. 일반적으로 기본 항체와 이차 항체를 사용하여 탐지를 증폭시킬 수 있습니다.
5. 세척 (Washing): 항체와 면 또는 멤브레인 간의 비특이적인 바인딩을 제거하기 위해 면 또는 멤브레인을 여러 번 세척합니다.
6. 반응 개발 (Detection): 이어서 효소로 부착된 이차 항체를 사용하거나 형광으로 표시된 이차 항체를 사용하여 단백질을 검출합니다. 반응 개발 시 적절한 형광 또는 효소 반응을 진행하고 밴드를 형성합니다.
7. 이미지 캡처 및 분석: 밴드를 이미지로 캡처하고, 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 밴드의 강도를 측정합니다.
8. 결과 해석: 밴드 강도는 단백질 양을 나타내며, 다른 시료 간에 비교할 수 있습니다.

웨스턴 블롯은 상세하고 복잡한 과정이므로, 정확한 결과를 얻기 위해 신중하게 진행되어야 합니다. 실험 계획을 세우고 올바른 품질의 재료와 장비를 사용하는 것이 중요합니다. 또한 올바른 읽기 및 해석 방법이 필요하며, 실험을 반복하여 결과를 확인하고 검증하는 것이 좋습니다. 실험을 수행할 때 항상 안전규정을 따르고 안전장비를 착용해야 합니다.